财政部关于公路车辆通行费使用票据问题的复函

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四川省人民政府办公厅


四川省人民政府办公厅关于印发四川省各级人民政府及有关部门安全生产监督管理职责规定的通知

川办发[2011]20号



各市（州）、县（市、区）人民政府，省政府各部门、各直属机构：

　　《四川省各级人民政府及有关部门安全生产监督管理职责规定》已经省政府领导同志同意，现印发你们，请认真贯彻执行。

　　〔请各县级人民政府将此件转发至各乡（镇）人民政府（街道办事处）及辖区内各生产经营单位〕

　　

四川省各级人民政府及有关部门
安全生产监督管理职责规定

　　
第一章　总　则

　　第一条　为切实落实全省各级人民政府及有关部门安全生产监督管理职责，加强安全生产监督管理，防范和减少各类生产安全事故，保障人民群众生命财产安全，根据《中华人民共和国安全生产法》、《生产安全事故报告和调查处理条例》（国务院令第493号）、《四川省安全生产条例》、《四川省生产安全事故报告和调查处理规定》（省政府令第225号）、《国务院安委会关于印发国务院安全生产委员会成员单位安全生产工作职责的通知》（安委〔2010〕2号）等法律、法规、规章和有关规定，结合四川实际，制定本规定。

　　第二条　四川省行政区域内各级人民政府及有关部门履行安全生产监督管理职责，适用本规定。

　　法律、法规、规章和国务院制发的规范性文件对政府及有关部门安全生产监督管理职责另有规定的，从其规定。

　　第三条　安全生产监督管理坚持“安全第一、预防为主、综合治理”的方针，实行“属地监管与分级监管相结合，以属地监管为主”和“谁主管、谁负责”、“管生产（经营）必须管安全”、“谁审批、谁负责”的原则，落实安全生产岗位责任（一岗双责）制度。

　　第四条　生产经营单位是本单位安全生产的责任主体，依据《四川省生产经营单位安全生产责任规定》（省政府令第216号）和有关规定对本单位的安全生产负主体责任。

　　各级人民政府及有关部门依照有关法律、法规、规章和本规定的规定，承担本行政区域、本部门职责范围内安全生产工作的监督管理职责。

　　第五条　安全生产监督管理职责实行“行政首长负责制”和“一岗双责制”，各级人民政府及有关部门的主要负责人是本行政区域、本部门职责范围内安全生产工作第一责任人，对安全生产工作负全面领导责任；分管安全生产工作的负责人对安全生产工作负综合监管领导责任，承担安全生产综合协调、监督、指导责任，定期向第一责任人报告安全生产工作的综合履职情况；其他负责人对分管业务工作范围内与安全生产直接或间接相关的安全生产工作负直接领导责任，在研究、部署、检查相关工作时，对安全生产工作同时研究、同时部署、同时检查，定期向第一责任人报告安全生产履职情况并通告分管安全生产的负责人。

　　第六条　安全生产监督管理部门对本行政区域内安全生产工作实施综合监督管理，指导、协调、监督、检查下级人民政府及有关部门和同级政府有关部门的安全生产工作。其他有关部门依照有关法律、法规、规章的规定，结合行业或领域实际，在各自职责范围内对有关安全生产工作实施监督管理，定期向同级政府报告和安全生产监督管理部门通报安全生产有关工作情况。

　　第七条　各级人民政府对辖区内生产经营单位按照属地管理和分级管理相结合以属地监管为主的原则进行安全生产监督管理。中央在川和省属重点企业的安全生产监督管理，按照《四川省人民政府办公厅关于加强中央在川企业和省属企业安全生产工作的通知》（川办发〔2004〕29号）规定执行。


第二章　政府安全生产工作职责

　　第八条　各级人民政府安全生产工作职责：

　　（一）将安全生产纳入经济和社会发展总体规划，与经济和社会发展工作同时安排、同时部署、同时检查、同时考核和奖惩。

　　（二）加强对安全生产工作的领导、组织、督促;支持各有关部门、单位依法履行安全生产监督管理职责，及时协调、督促解决安全生产工作中的重大问题，从人员、职责、经费、其他必要手段等多方面确保有关部门安全生产监督管理工作的有效开展。

　　（三）采取多种形式，提供有效保障条件，支持、督促政府安全生产监督管理部门和有关部门加强安全生产法律、法规、政策和相关知识的宣传教育，提高全社会安全生产意识和能力。

　　（四）加强产业政策引导，调整和优化产业结构，淘汰不符合产业政策和不具备安全生产条件的工艺和设施，督促生产经营单位提升安全生产保障能力。

　　（五）建立健全各级人民政府安全生产监督管理组织保障体系和执法监察体系，落实人员编制、职责、经费、装备，确保与安全生产工作条件和任务相适应。

　　（六）建立健全安全生产激励保障机制，把安全生产控制考核指标纳入经济社会发展指标体系，实行“一票否决”。完善安全生产责任体系和安全生产监督管理工作考核奖惩制度，落实“一岗双责”，把安全生产工作纳入领导干部政绩考核范围。

　　（七）根据本行政区域内的安全生产状况，组织有关部门按照职责分工，对生产经营单位严格监督检查；对发现的事故隐患和违法行为，立即督促有关单位及时处置和排除；组织开展公共设施、场所、重点行业、重点领域的安全生产专项整治，及时消除事故隐患。

　　（八）严厉打击非法违法生产、经营、建设等影响安全生产的行为，依法关闭不符合基本安全生产条件的生产经营单位。

　　（九）加大安全生产投入，加强安全生产基础设施建设和支撑体系建设。加强对建设项目安全设施“三同时”监督管理工作的领导，支持、督促有关部门建立完善建设项目安全设施监督管理制度；鼓励和支持安全生产科学技术研究和安全生产先进适用技术的推广应用和成果转化，提高安全生产水平；推广运用信息化等手段，提升安全生产监督管理水平。

　　（十）建立健全应急救援体系，加强应急管理机构建设，编制安全生产应急预案，定期组织应急救援演练，建立基层安全生产应急救援队伍，配备适应抢险救援实际需要的装备，建立安全生产应急指挥平台和高效运转的预警、联动机制，领导和组织指挥事故应急救援工作。

　　（十一）及时统计和上报生产安全事故，组织事故调查，或授权、委托有关部门进行事故调查，对调查报告作出批复，并督促有关部门落实处理意见，依法依规追究生产安全事故责任单位和责任人员的责任，并向社会公布事故调查处理结果。

　　（十二）建立举报奖励制度，鼓励公众监督举报各类安全事故隐患和安全生产重大违法行为，对举报生产安全事故、安全生产违法行为和重大安全隐患的有功人员给予奖励。

　　（十三）应当履行的其他安全生产职责。

　　第九条　各级人民政府安全生产委员会在本级政府领导下开展工作，研究部署、指导协调和督促检查本行政区域内的安全生产工作；研究提出安全生产工作的重大方针、政策；分析安全生产形势，研究、协调和解决安全生产工作中的重大问题；审定和分解下达年度安全生产控制考核指标，制定年度安全生产工作考核细则，指导安全生产委员会办公室具体实施相关考核工作。

　　各级人民政府安全生产委员会办公室负责组织调查、研究辖区安全生产情况，提出安全生产工作重大措施建议；监督检查、指导协调同级人民政府有关部门和下级人民政府及其有关部门的安全生产工作，负责对下级人民政府、同级政府有关部门安全生产目标考核并定期进行督促检查；组织辖区安全生产大检查和专项督查；承办安委会的会议和重要活动，督促、检查安委会会议决定事项的贯彻落实情况；承办同级人民政府和安全生产委员会交办的其他安全生产事项。


第三章有关部门安全生产监督管理职责

　　第十条　各级人民政府有关部门安全生产监督管理工作共同职责：

　　（一）认真宣传贯彻落实国家有关安全生产的法律、法规、规章、政策等有关规定，将安全生产工作与经济发展、行业（领域）管理的有关工作协调一致，同时计划、安排、布置、检查和总结。

　　（二）加强生产安全事故预防，协调解决安全生产工作过程中遇到的矛盾、困难和问题，开展安全生产专项整治，及时组织、指导、督促、协调有关单位消除所涉及行业领域的安全隐患。

　　（三）按照本级政府要求，组织或参与生产安全事故的调查处理，在职责范围内负责落实事故责任单位和责任人的有关责任追究。

　　（四）加强安全生产应急管理工作，建立完善应急预案体系，根据实际情况组织演练；加强部门间的应急协同联动，充分利用有效资源，及时妥善处置安全生产突发事件。

　　（五）积极参加安全生产重大活动，组织实施和完成本级政府及其安委会下达的安全生产工作目标和综合目标任务，严格管理和考核。

　　（六）负责督促、指导本行业（领域）、系统内企事业单位依法开展新、改、扩建项目安全设施“三同时”工作。

　　（七）依据有关规定负责和承办上级或同级人民政府及其安全生产委员会以及相关上级主管部门交办的安全生产其他工作事项。

　　第十一条　各有关部门安全生产监督管理具体职责：

　　（一）发展改革部门（省能源管理部门）。

　　1．负责将安全生产工作纳入国民经济与社会发展规划，将安全生产技术支撑体系建设和生产安全事故应急救援体系建设纳入基础设施建设规划，并协调有关部门组织实施。

　　2．在建设项目审批、核准、备案时，认真执行国家产业政策和建设项目安全设施“三同时”规定，对无相关手续的项目不予立项和给予其他支持。

　　3．建立安全生产行政事业收费和评价、检测检验等社会中介服务与收费价格管理制度。

　　4.会同有关部门做好煤炭行业结构调整、煤矿安全改造和瓦斯治理利用工作，协同推进淘汰煤炭落后产能、优化煤炭结构、煤炭产业升级和煤矿整合兼并重组工作。

　　（二）经济和信息化部门（中小企业管理部门）。

　　1．负责所管理的电力、煤炭、成品油、天然气、电子信息产品制造、重大技术装备、机械、冶金、建材、化工、医药、轻工、纺织、机电、通信等行业（系统）有关安全生产管理具体办法的制定、指导和实施，督促企业落实有关安全管理制度和措施。充分发挥行业协会的作用，加强企业安全生产管理工作，不断提高企业安全生产管理水平。

　　2．负责将技术改造、技术创新项目安全设施“三同时”审查手续作为办理相关项目核准、备案、竣工验收的重要依据；充分利用好各种专项经费，保障安全技术措施的有效落实；支持先进工艺技术，对不符合有关安全标准，安全性能低下，职业危害严重，危及安全生产的落后技术、工艺和装备要列入产业结构调整指导目录，予以强制性淘汰。

　　3．鼓励和引导企业研发、采用先进适用的安全技术和产品，鼓励安全生产适用技术和新装备、新工艺、新标准的推广应用。把安全检测监控、安全避险、安全保护、个人防护、灾害监控、特种安全设施及应急救援等安全生产专用设备的研发制造，作为安全产业加以培育，纳入国家振兴装备制造业的政策支持范畴。为安全生产监督管理信息化建设提供业务指导。大力发展安全装备融资租赁业务，促进高危行业企业加快提升安全装备水平。

　　4．依法查处拼装车、船非法生产点及擅自从事成品油经营的非法经营点；在职能范围内组织、配合查处其他非法生产经营行为。

　　5．负责电子信息产业行业安全生产的指导，负责无线电台（站）通信安全监督管理；负责本行政区域内无线电频率和台站管理，查处有害无线电干扰行为，重点保障航空、水上交通通信频率安全。

　　（三）教育部门。

　　1．按照《四川省学校安全管理办法》规定，履行加强当地学校安全管理的主导责任。

　　2．负责教育系统的安全监督管理，拟定学校安全工作的有关规章制度并指导实施。

　　3．将安全教育纳入学校教育内容，指导中小学校和中等职业学校开展安全教育活动，普及安全知识。

　　4．督促、指导各类学校的安全管理工作，指导各类学校制定突发事件应急预案并组织应急避险演练，落实安全防范措施。

　　5．在职责范围内指导各类学校开展安全检查，组织、协调、督促消除安全隐患；负责组织直属学校、单位和教育设施的安全监督管理。

　　6．会同有关部门加强对接送学生车辆的安全监督管理。

　　7．指导各类学校加强学生校外实践活动的安全管理。

　　（四）科学技术部门。

　　1．将安全生产科技进步纳入科学技术发展计划，并组织实施。

　　2．组织安全生产领域关键核心技术攻关，支持科研机构、高等学校等有关单位开展安全生产科学技术研究、开发与示范以及安全生产科技成果转化与推广应用，推动安全生产科技进步。

　　3．引导企业增加安全生产研发资金投入，使其逐步成为安全生产科研开发的重要力量。

　　（五）公安部门。

　　1．参与道路交通安全规划，依法对本行政区域内的道路交通安全工作实施监督管理。

　　2．依法对本行政区域内的消防工作实施监督管理。

　　3．负责危险化学品公共安全管理，依法审查、核发剧毒化学品、易制毒化学品购买凭证、准购证、运输证、剧毒化学品和放射性物品公路运输通行证，划定禁止危险化学品运输车辆通行区域，进一步完善危险化学品禁止通行标志，监督检查运输企业在危险化学品运输车辆或罐体按规定安装和喷涂安全警示标志，并对相应持证单位及个人购买、运输、储存、使用剧毒化学品及其执行法律、法规的情况进行监督检查。

　　4．负责民用爆炸物品和烟花爆竹公共安全管理，依法审查、核发民用爆炸物品准购证和烟花爆竹道路运输许可证、烟花爆竹燃放许可证，对民用爆炸物品、烟花爆竹的道路运输实施安全监督检查，打击无证运输、买卖、使用民用爆炸物品和侦查非法生产、买卖、储存、运输、邮寄烟花爆竹行为；负责爆破作业的安全管理；负责丢失、被盗放射源的追缴及相应案件的查处。

　　5．负责大型群众性活动的安全管理，对大型群众性活动实行安全许可制度；对举办焰火晚会以及其他大型焰火燃放活动实行安全许可制度，并核发焰火燃放许可证。

　　6．在政府及有关部门履行安全生产监督管理职责的过程中，运用相关职能和手段，配合打击安全生产非法违法行为，依法查处涉及安全生产的刑事犯罪案件和治安管理案件。

　　公安交警部门

　　参与道路交通安全规划制定和实施；加强道路交通安全法律、法规宣传；严格道路交通秩序管理，依法查处道路交通安全违法行为；强化机动车、驾驶人发牌、发证考核等源头管理，严厉打击套牌、假牌、无牌等涉牌车辆、无证驾驶等违法行为，严把预防道路交通事故第一关口；参与道路交通安全综合执法检查和整治；配合行业主管部门督促各有关单位落实交通安全责任制；在道路交通安全管理中推广、应用先进的管理方法、技术和设备；协助行业主管部门督促大型客、货运输车辆使用行驶记录仪、危险货物运输车辆车载监测监控系统、GPS（GPRS）等加强动态监管。

　　公安消防部门

　　组织制定有关消防安全管理办法；开展消防安全宣传教育，指导社会消防力量的培训；依法实施建设工程消防设计审核、消防验收和备案抽查，有关建设工程消防施工的监督管理，歌舞厅、影剧院、宾馆、饭店、商场等公众聚集场所投入使用、营业前的消防安全检查，以及对机关、团体、企业、事业等单位和有固定经营场所且具有一定规模的个体工商户履行消防安全职责情况的监督检查，督促有关单位落实火灾隐患整改措施，依法查处消防安全违法行为。

　　（六）行政监察部门。

　　1．按照干部管理权限，对各级人民政府和政府组成部门及其工作人员履行安全生产监督管理职责实施监察；督促、协调、指导解决安全生产监督管理工作中遇到的实际问题。

　　2．参与生产安全责任事故调查，负责生产安全责任事故中有关行政责任追究工作，监督检查事故行政责任追究落实情况。

　　（七）民政部门。

　　1．负责殡葬设施、设备的安全管理，配合公安、国土资源等相关部门打击违法兴建殡葬设施。

　　2．负责救助管理站（流浪未成年人救助保护中心）、福利院、敬老院的安全监督管理工作。

　　3．负责农村自然灾害救助工作；协助做好生产安全事故的临时性救助工作。

　　（八）司法行政部门。

　　1．将安全生产法律法规普及纳入公民普法教育的重要内容，会同有关部门宣传普及有关安全生产法律法规知识，督促、指导律师、公证员、基层法律服务工作者、司法鉴定人、法律援助工作者为安全生产工作提供法律服务。

　　2．督促、指导、协调、支持监狱、劳教管理机构对监狱、劳教单位贯彻执行安全生产法律、法规和标准，落实安全生产责任制，完善安全生产条件，消除事故隐患的相关工作。

　　监狱、劳教管理机构

　　对监狱、劳教单位贯彻执行安全生产法律、法规和标准，落实安全生产责任制，完善安全生产条件，消除事故隐患履行监督管理职责。

　　 （九）财政部门。

　　1负责审核同级政府安全生产监管部门年度部门综合预算。

　　2按照现行事权、财权划分原则，为包括安全生产行政执法工作在内的安全生产监管工作提供必要的经费保障，支持安全生产应急体系建设。

　　3加大对公共安全的投入力度，为完善公共安全基础设施和及时消除公共安全隐患提供必要经费保障。

　　（十）人力资源社会保障部门。

　　1．将安全生产法律法规纳入行政机关公务员、事业单位工作人员普法教育的重要内容和培训学习计划并组织实施，将安全生产责任履行情况作为行政机关公务员、事业单位工作人员奖惩、考核的重要内容。

　　2．组织实施注册安全工程师执业资格制度，负责注册安全工程师执业资格考试、发证工作，对注册安全工程师资格考试、注册、执业、继续教育等工作进行指导、监督和检查。

　　3．负责监督检查企业制定劳动规章制度及执行情况，签订劳动合同中是否具备劳动保护、劳动条件和职业危害防护等条款；规范企业劳动用工行为。

　　4．指导、监督企业参加工伤保险，落实工伤保险政策，建立工伤保险安保互动机制。在职责范围内，指导、督促有关责任单位做好生产安全事故的善后处理工作，做好职工工伤认定、劳动能力鉴定、工伤保险待遇支付工作。

　　5．加强安全生产职业技能人才培养，指导、监督各级各类技工学校、民办职业培训机构按国家和省有关规定履行安全管理责任。

　　6．在职能范围内，建立安全生产工作激励保障制度，根据安全生产工作风险高、工作量大等特点，对安全生产专业人才、专门工作人员建立相应使用、劳动保障等有效激励机制。

　　 （十一）国土资源部门。

　　1．将安全生产监督管理部门对《矿产资源开发利用方案》中安全部分的审查意见作为办理采矿许可证的前置条件之一。探矿人的勘查项目必须由具有安全生产资质的地勘单位承担。根据矿产资源法律法规规定，查处无证采矿、以采代探、超层越界开采等非法勘查开采矿产资源的违法行为。

　　2．积极配合有关部门组织开展矿山安全专项整治工作，对因安全、环保等不合格政府决定关闭的矿山企业，按规定及时注销或吊销采矿许可；采矿许可证被暂扣、撤销、吊销和注销或者到期未延续的矿山企业，及时通报安全生产监督管理部门。

　　（十二）环境保护部门。

　　负责放射性同位素与射线装置及放射性废物的安全管理工作，依法查处放射性同位素与射线装置生产、储存、转让、使用过程中的违法行为；负责监管危险废物的处置；负责生产安全事故造成污染和生态破坏事件的现场应急监管、应急监测和相关处置工作；负责制定突发环境事件和生态破坏事件的应急预案并组织实施。

　　（十三）住房城乡建设部门。

　　1．在城乡规划建设管理中严格执行城乡规划、工程勘察、设计、施工、监理和竣工验收的国家标准、规范，严格执行安全生产的强制性规定，依法保障安全生产的措施作为核发施工许可的重要条件。

　　2．负责制定完善建筑安全生产监督管理规定并监督执行，对房屋建筑和市政工程施工的安全生产进行监督管理。

　　3．负责对房屋建筑和市政基础设施工程施工场地用施工起重机械、专用机动车辆的安装、使用进行监督管理。

　　4．建设部门（含市政、城管部门）负责市政道路、城市桥梁、隧道建设、养护、维修和安全隐患的排查、检测、治理及建筑拆迁施工过程中的安全生产管理，以及风景名胜区、公园、城镇燃气、供水、污水和垃圾处理的安全监督管理。

　　（十四）交通运输部门。

　　1．负责内河通航水域客、货运输安全监督管理工作。依法对港口安全生产工作实施监督管理。

　　2．负责道路营业性客、货运输安全生产源头监督管理工作。对运输经营者市场准入条件、营运车辆技术状况、营运驾驶员从业资格进行审查。在政府的领导下，配合相关部门严厉打击非法客运，负责汽车客运站（场、点）源头安全监督工作。

　　3．负责对公路、水运工程从业单位（建设、勘察、设计、监理、施工、检验检测、安全评价）安全生产条件实施监督管理。

　　4．负责道路、水运交通运输安全专项整治工作，负责道路安全防护栏和道路指示标牌的建设，消除事故隐患；强化公路设计、施工、管理等方面的安全保障。负责检查、指导、督促公路安全隐患的排查和治理工作。

　　5．负责监督管理有关危险化学品道路运输企业、通航水域运输企业和港口作业安全生产工作。

　　6．按规定负责组织、督促、指导本行业内企业依法依规开展新、改、扩建项目安全设施“三同时”工作。

　　交通运输部门道路运输管理机构

　　负责道路运输企业安全生产源头监督管理工作。依法对道路运输经营许可、营运车辆技术等级评定、营运驾驶人从业资格进行监督管理。负责对危险品货物运输许可、运输经营进行监督管理。负责道路运输客运企业、汽车客运站安全生产评估工作的组织实施。引导和鼓励企业使用GPS系统，推动运输企业对运输车辆的动态监控。

　　交通运输部门公路管理机构

　　指导公路建设和公路养护安全管理工作；协调因自然灾害造成的公路毁损的抢修和公路战备安全保障工作；指导强化公路设计、施工、管理等方面的安全保障，严格建设项目安全设施“三同时”工作。督促指导下级交通运输部门对危险路段进行排查治理，对现有公路的危险路段进行改造。

　　交通运输部门航务海事机构

　　负责所辖通航水域从事客、货运输船舶的安全监督管理工作。加强水上交通安全法律、法规宣传；维护通航水域通航秩序；对所辖区域内从事水上交通的客、货运输船舶进行登记、检验；组织从事客货运输船员考试发证和考核工作；依法对港口安全生产工作实施监督管理；依法查处水上交通违法行为；负责所辖通航水域运输企业和港口作业安全管理工作。审核转报危险化学品水运企业办理水路运输行政许可申请，并负责前述事项的监督检查。

　　（十五）水利部门。

　　1．负责水利工程设施、河道及其岸线、渔业生产的安全监督管理，对管辖的水库（水电站）、河道（湖泊）、堤防、水闸、渠道进行安全监控和事故防范工作。

　　2．负责水利工程建设安全监督管理工作和水利系统管理的水电站、县域电网安全监督管理工作。

　　3．负责渔业船舶安全监督管理。指导渔业船员培训、安全教育和考核发证工作。

　　（十六）农业部门（农机管理部门）。

　　严格依法对具有农业部和省级农机主管部门鉴定推广证书，并列入监管目录的各类型拖拉机、联合收割机等农业机械的注册登记、牌证核发和安全技术检验及驾驶员（操作人员）的培训、考试、发证、审验、安全教育、安全执法检查、事故处理等进行监督管理。

　　（十七）林业部门。

　　负责所属国有林场、森林公园、自然保护区和直属企事业单位在植树造林、森林管护、林木采伐、林区建设等作业生产中的安全管理。

　　 （十八）商务部门。

　　1．协助指导商贸流通企业加强安全生产工作，贯彻安全生产法律、法规，落实安全防范措施。配合有关部门对商贸流通企业违反安全生产法律法规行为进行查处。

　　2．加强对境外中资企业安全生产工作的指导和管理，严格落实境内投资主体和派出企业的安全生产监督责任。

　　（十九）文化部门。

　　1．负责文化系统所属企事业单位的安全管理，组织开展文物收藏单位、文物保护单位、图书馆、文化馆、剧院（场）等公共文化单位的安全检查，指导、督促相关单位排查和消除事故隐患，负责直属文艺演出单位安全监督检查工作。

　　2．配合公安消防、安全监管等部门开展对网吧、歌舞厅等公众文化娱乐场所的安全检查、指导及专项整治工作，在职责范围内，对不符合安全基本要求的场所，依法暂扣或吊销有关经营许可资格资质。

　　 （二十）卫生部门。

　　1．负责卫生系统安全管理工作，指导医疗卫生机构做好医疗废弃物、放射诊疗安全处置管理工作。

　　2．参与组织突发生产安全事故的医疗救援。

　　3．负责化学品毒性鉴定、个人剂量监测、放射防护器材和含放射性产品检测等技术服务机构的资质认定和监督管理。

　　4．负责医疗机构放射性危害控制的监督管理。

　　（二十一）国有资产监督管理机构。

　　1．履行国有资产出资人安全生产监督管理职责，督促检查相关企业落实安全生产责任制和安全生产措施。

　　2．负责将安全生产工作纳入对企业负责人的业绩考核，并与企业负责人薪酬挂钩。
　　
　　3．引导企业统筹规划安全生产工作，督促企业加大隐患治理力度和落实应急救援预案。

　　（二十二）工商行政管理部门。

　　1．按照行政许可的规定，坚持“先证后照”的原则，负责在企业登记时对涉及安全生产的有关前置审批要件依法进行审查。对取证后涉及变更企业名称、法定代表人、经济类型等内容的，要先变更营业执照，后变更安全生产许可证；对取证后涉及变更生产、经营范围、企业住所或地址的，按照“先证后照”的原则，对未取得有关部门安全生产审批或许可的，不予登记或年检。将促进企业安全生产作为整顿市场秩序的重要内容纳入工商行政管理工作计划并组织实施。

　　2．配合有关部门监督管理危险化学品、烟花爆竹、易燃易爆品等危险物品的市场经营活动，配合有关部门依法取缔和打击非法、违法经营危险物品行为。

　　3．配合有关部门开展安全生产专项整治，对有关部门撤销许可的企业，依法督促其办理变更经营范围或注销登记；配合有关部门依法查处取缔未经安全生产（经营）许可的企业。

　　4．配合有关部门加强对商品交易市场的安全检查，督促市场开办者加强安全管理，配合有关部门及时消除事故隐患，严防火灾和其他安全事故的发生。

　　（二十三）质量技术监督部门。

　　1．负责特种设备，包括锅炉、压力容器（含气瓶）、压力管道、电梯、起重机械、客运索道、大型游乐设施和场（厂）内专用机动车辆生产、使用、检验检测等安全监察，强化机动车安全技术检验等源头管理。

　　2．负责特种设备生产、使用单位及检验检测机构的行政许可和监督管理工作；查处特种设备生产、使用、检验的违法行为。

　　3．负责危险化学品及其包装物、容器和烟花爆竹的质量监督检查，按照《工业产品生产许可证管理条例》有关规定，对列入生产许可证管理范围的危险化学品及其包装物、容器严格行政许可，加强证后监管。

　　4．负责特种设备事故隐患和重点监控特种设备的监督管理工作，督促有关单位对事故隐患进行整治。

　　5．负责特种设备作业人员的考核、发证、监督工作及特种设备作业人员考试机构的监督管理。

　　6．负责机动车安全技术检验机构的资格管理。

　　（二十四）广播电影电视部门。

　　1．将安全生产宣传纳入社会公益性宣传范畴，采取措施，加强安全生产宣传工作；组织落实政府及其安委会确定的安全生产宣传任务。

　　2．组织广播电台、电视台等新闻媒体配合政府有关部门共同开展安全生产宣传教育和安全生产重大宣传活动。

　　3．负责本系统所属单位安全管理。

　　（二十五）安全生产监督管理部门。

　　1．负责制定安全生产发展规划，定期分析和预测安全生产形势；组织、指导安全生产重大科学技术研究和技术推广示范工作。

　　2．负责组织、指导安全生产宣传教育及培训考核工作；综合管理生产安全事故调度统计工作。

　　3．负责综合指导、协调和监督检查本级政府有关部门和下级政府及其负有安全生产监督管理职责的有关部门安全生产工作，监督考核并通报安全生产控制指标执行情况，监督、指导落实安全生产责任制，监督事故查处和责任追究落实情况。

　　4．负责生产安全事故的综合监督管理，依法组织生产安全事故调查组对生产经营活动过程中的生产安全事故进行调查和处理。

　　5．负责综合监督、检查、指导各有关行业主管部门对重大危险源监控、管理及事故隐患的整改工作。组织、指导和协调开展安全生产应急救援工作。

　　（二十六）旅游部门。

　　负责旅行社安全生产的监督管理工作；指导、督促A级旅游景区和星级饭店落实有关安全制度的措施；配合有关部门做好其他旅游企业的安全生产监督管理工作。

　　（二十七）国防科技工业管理部门。

　　1．负责职责范围内国防科技工业企事业单位的安全生产监督管理。

　　2．负责民用爆炸物品生产许可的受理审查及监督管理。

　　3．负责民用爆炸物品销售许可证核发及监督管理；负责民用爆炸物品生产、销售企业的安全生产监督管理工作，依法查处民用爆炸物品生产、销售的安全生产违法行为。

　　 （二十八）政府法制部门。

　　1．负责审查、修改有关安全生产方面的地方性法规草案、政府规章草案以及规章的立法解释，本级政府行政规范性文件的合法性审查；负责有关安全生产方面行政规范性文件的备案审查。

　　2．协同有关部门开展安全生产执法检查。

　　3．按照法律法规的规定办理安全生产行政复议案件。

　　（二十九）机构编制部门。

　　1．负责审查、修改有关安全生产方面的地方性法规草案、政府规章草案以及规范性文件中涉及机构编制的内容。

　　2．加强安全生产监督管理队伍建设，协调、解决安全生产监督管理工作中涉及的编制和职能问题。

　　3．会同有关部门研究提出政府有关部门安全生产监督管理职责的意见，研究提出完善安全生产监督管理体制的意见，为进一步加强安全生产监督管理工作提供体制机制保障。

　　（三十）气象部门。

　　负责重大灾害性天气的监测、预报、警报工作，及时发布天气预警、预报信息，及时将重大灾害性天气预警信息通报交通运输、公安等部门；负责雷电灾害安全防御的组织管理工作，组织防雷设施的安全检查及雷电防护装置的安全检测；负责监督管理无人驾驶自由气球和系留气球、人工影响天气装备及作业期间的安全管理。

　　（三十一）粮食部门。

　　负责粮食部门的安全监督管理，督促检查粮食企业落实安全生产责任制，完善消防安全设施，加强储粮化学药剂和设施设备安全管理，开展安全专项检查，消除事故隐患。

　　 （三十二）食品药品监督管理部门。

　　1．负责对餐饮服务环节、保健食品、化妆品、药品质量安全监督管理，监督检查餐饮服务、保健食品、化妆品、药品生产企业建立健全安全生产责任制，防范餐饮服务环节、保健食品、化妆品、药品安全事故的发生。指导食品消费环节、保健食品、化妆品、药品生产经营企业加强安全生产工作，督促餐饮服务环节、保健食品、化妆品、药品生产经营使用单位学习贯彻安全生产法律法规，落实安全防范措施。

　　2．加强餐饮服务环节、保健食品、化妆品、药品安全应急管理工作，编制应急预案和组织演练，配合有关部门加强部门间的应急联动，防范生产安全事故发生和减少损失。

　　（三十三）电力监督管理部门。

　　监督检查电力安全生产有关规定的执行情况；组织开展电力安全生产大检查、安全生产专项检查，组织发电机组并网安全性评价；按照职能分工，开展水电站大坝安全监管、电力可靠性监管和重要用户供用电安全监管等工作；与政府有关部门共同组织电力突发事件应急处置工作。

　　（三十四）政府其他有关部门和直属事业单位。

　　1．贯彻执行有关安全生产法律法规的规定，落实安全生产监督管理责任。督促所属企业加强安全生产管理，完善各项规章制度，加大安全投入，提高各类人员的安全技术素质，确保企业安全生产。

　　2．针对本行业（系统）特点经常组织召开安全生产会议，布置各阶段安全生产工作。

　　3．组织本行业开展安全生产大检查活动，纠正各种违章行为，消除事故隐患，防止各类事故发生。

　　4．负责本行业所属企业的隐患排查及隐患整治工作，摸清企业重特大隐患情况，并督促企业整改。

　　第十二条　有下属企事业单位的其他部门，负责监督管理下属企事业单位的安全生产工作，并对其安全生产工作进行考核和奖惩。

　　第十三条　市（州）、县（市、区）级有关部门与省级有关部门的职责不对应的，由市（州）、县（市、区）人民政府根据各地实际作出界定。


第四章　责任落实保障措施

　　第十四条　各级人民政府应当至少每季度召开一次安全生产工作会议，由政府主要负责人或者委托政府分管负责人召集有关部门参加，分析、部署、督促、检查本行政区域防范安全生产事故的工作，会议应当作出决定并形成纪要。会议纪要应报上一级人民政府安全生产监督管理部门备案，会议确定的各项防范措施由同级人民政府督查机
构跟踪督查。

　　第十五条　各级人民政府应当组织有关部门按照职责分工对本地区容易发生生产安全事故并产生较大负面影响的单位、设施和场所进行严格检查，采取防范措施。容易发生重大及以上生产安全事故的具体单位、设施和场所名单及其整改责任部门，由同级人民政府安全生产委员会确定。

　　第十六条　政府有关部门应当依法对生产经营单位贯彻安全生产法律法规和国家标准、行业标准情况进行监督检查。政府有关部门在监督检查中，应当互相配合，需共同开展检查的，实行联合检查；分别进行检查的，应当互通情况，对发现的问题应由相关部门处理的，应当及时移送相关部门并形成记录备查，接受移送的部门应当及时进行处理。　

　　有关部门在安全生产检查时，应当将检查时间、地点、内容、发现的问题以及下达的执法文书、督促整改情况做出书面记录，采用录音、录像、照相等有效手段留下详实证据，并由检查人员和被检查单位的负责人签字；被检查单位的负责人拒绝签字的，检查人员应当记录在案，及时向本部门负责人报告。

　　第十七条　建立重大安全隐患整改督办制度。对生产安全事故暴露出来的以及安全生产督查、检查中发现的生产安全重大隐患，各级人民政府安委会或其办公室应当根据有关规定向本级政府有关部门和下级政府下达隐患整改意见书并督促整改，收到隐患整改意见书的政府和有关部门应当负责落实整改。

　　重大安全隐患排除前或者排除过程中无法保证安全的，应当责令其从危险区域内撤出作业人员，责令暂时停产停业或者停止使用；重大安全隐患排除后，经审查同意，方可恢复生产经营和使用；未排除的，不得恢复生产经营和使用。

　　第十八条　建立隐患整改综合执法制度。对拒不执行隐患整改意见或整改后仍达不到要求的，根据隐患所在单位的具体情况由涉及的相关部门及时依据有关法律、法规规定处理。

　　政府安全生产委员会办公室对落实情况进行监督，对拒绝、阻碍、干扰监督工作的，要立即向上一级人民政府有关部门和同级人民政府报告。凡不按上述要求履行职责、导致事故发生的，要依法进行查处，严肃追究有关单位、部门和责任人的责任。

　　第十九条　各级人民政府应当建立完善安全生产和自然灾害预报预警预防体系，制定和完善自然灾害应急预案。气象、应急、安全监管、交通运输、国土资源、水利、广电、经济和信息化、林业、住房城乡建设等部门应当建立灾害性天气、地质灾害和生产安全事故监测和预警预报机制，形成部门联动、信息共享、联合协调的灾害预防和救助体系，并加强灾害性天气、极端气候及地质灾害的监测预报，及时准确发布各类灾害预警信息，以避免或降低带来的生产安全事故损失。

　　第二十条　各级人民政府及其有关部门落实安全生产监督管理责任的情况应当纳入领导干部年度政绩考核的重要内容，作为领导干部、领导班子领导能力的重要指标及使用干部的重要依据。

　　上级人民政府应当对本级人民政府有关部门和下级人民政府安全生产责任目标落实情况进行半年跟踪落实、年终考核，并予以通报。

　　凡未落实安全生产责任，并因此造成事故的责任单位和责任人员，必须依法依规追究责任，严肃处理。

　　第二十一条　各级人民政府及其有关部门领导班子成员在安全生产监督管理工作中出现重大问题的，对提拔使用和评先评优实行一票否决。各级人民政府及其有关部门没有完成年度生产安全事故控制指标，实行一票否决，并取消评先评优资格。

　　各级人民政府及其有关部门凡涉及相关表彰奖励的，应事先征求安全生产监督管理部门对其履行安全生产职责及其后果的意见。

　　第二十二条　各级人民政府及其有关部门未定履行安全生产监督管理职责造成严重后果，依据有关法律法规的规定追究有关人员责任。


第五章　附　则

　　第二十三条　本规定所称主要负责人，是指政府及有关部门的正职负责人，以及主持工作、代行正职职责的副职负责人；本规定所称分管负责人，是指负责某一方面工作的副职负责人。

　　第二十四条　本规定自公布之日起施行。本规定施行期间，有关部门的职能发生变动的，继续行使其职权的部门履行原部门的安全生产工作职责，并承担相应的安全生产责任。


卫生部办公厅


卫生部办公厅关于印发《人粒细胞无形体病预防控制技术指南（试行）》的通知

卫办应急发〔２００８〕１８号


各省、自治区、直辖市卫生厅局，新疆生产建设兵团卫生局：
近年来，我国部分地区首次出现人粒细胞无形体病疫情。为了提高医务人员对人粒细胞无形体病的认识，加强医疗机构的预防控制工作，规范病例诊断与报告、标本采集与检测、疫情控制与应急处置等方面的工作，我部组织专家制定了《人粒细胞无形体病预防控制技术指南（试行）》。现印发给你们，请遵照执行。
二○○八年二月十九日


人粒细胞无形体病预防控制技术指南
（试行）

人粒细胞无形体病（Human granulocytic anaplasmosis，HGA）是由嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum，曾称为“人粒细胞埃立克体，Human granulocytic ehrlichiae”）侵染人末梢血中性粒细胞引起，以发热伴白细胞、血小板减少和多脏器功能损害为主要临床表现的蜱传疾病。自1994年美国报告首例人粒细胞无形体病病例以来，近年来美国每年报告的病例约600~800人。2006年，我国在安徽省发现人粒细胞无形体病病例，其他部分省份也有疑似病例发生。该病临床症状与某些病毒性疾病相似，容易发生误诊，严重者可导致死亡。为指导临床医生和疾病预防控制专业人员做好该病的发现、报告、诊断、治疗、个人防护、实验室检测和疫情防控与应急处置工作，加强公众健康教育，制定本技术指南。
一、目的
（一）指导各级医疗机构正确开展人粒细胞无形体病的诊断和治疗，及时报告病例并做好个人防护和院内感染的控制工作。
（二）指导各级疾病预防控制机构开展人粒细胞无形体病流行病学调查、实验室检测和疫情监测控制工作。
（三）指导各地开展人粒细胞无形体病流行病学、病原学及防控策略的研究。
（四）指导各地做好预防人粒细胞无形体病的健康教育工作。
二、疾病概述
（一）病原学。
嗜吞噬细胞无形体属于立克次体目、无形体科、无形体属。无形体科是一类主要感染白细胞的专性细胞内寄生革兰阴性小球杆菌，其中对人致病的病原体主要包括无形体属（Anaplasma）的嗜吞噬细胞无形体、埃立克体属(Ehrlichia)的查菲埃立克体（E. chaffeensis）和埃文氏埃立克体（E.ewingii）、新立克次体属(Neorickettsia)的腺热新立克次体（N. sennetsu），分别引起人粒细胞无形体病、人单核细胞埃立克体病(Human monocytic ehrlichiosis, HME)、埃文氏埃立克体感染、腺热新立克次体病。
90年代初期，美国在多例急性发热病人的中性粒细胞胞质内发现埃立克体样包涵体。1995年，Goodman等从病人的血标本分离到该种嗜粒细胞病原体，将它非正式命名为人粒细胞埃立克体，其所致疾病称为人粒细胞埃立克体病。后经16S rRNA基因序列的系统发育分析，发现该种嗜粒细胞病原体与无形体属最相关，因此，将其归于无形体属的一个新种，命名为嗜吞噬细胞无形体，其所致疾病也改称为人粒细胞无形体病。
1. 形态结构及培养特性
嗜吞噬细胞无形体呈球状多型性，革兰氏染色阴性，主要寄生在粒细胞的胞质空泡内，以膜包裹的包涵体形式繁殖。用Giemsa法染色，嗜吞噬细胞无形体包涵体在胞质内染成紫色，呈桑葚状（图-1）。
嗜吞噬细胞无形体为专性细胞内寄生菌，缺乏经典糖代谢途径，依赖宿主酶系统进行代谢及生长繁殖，主要侵染人中性粒细胞。嗜吞噬细胞无形体的体外分离培养使用人粒细胞白血病细胞系（HL-60），主要存在于HL-60细胞内与膜结构相连的空泡内，生长繁殖迅速。其感染的空泡内无查菲埃立克体感染所形成的纤维样结构。嗜吞噬细胞无形体早期的形态多为圆形、密度较大的网状体，后期菌体变小且密度增大。嗜吞噬细胞无形体的外膜比查菲埃立克体外膜有更多的皱折（图-2）。

图1 人血液中性粒细胞内无形体包涵体(X1000, JS Dumler) 图2 电镜下的无形体包涵体(X21960, JS Dumler)
2. 遗传及表型特征
嗜吞噬细胞无形体的基因组为1,471,282个碱基对，G+C含量为41.6%，含有1,369个编码框（ORF）。特征性基因为msp2以及AnkA基因，100%的菌株具有msp2，70%的菌株具有AnkA基因。
（二）流行病学。
1. 宿主动物与传播媒介
动物宿主持续感染是病原体维持自然循环的基本条件。国外报道，嗜吞噬细胞无形体的储存宿主包括白足鼠等野鼠类以及其他动物。在欧洲，红鹿、牛、山羊均可持续感染嗜吞噬细胞无形体。
国外报道，嗜吞噬细胞无形体的传播媒介主要是硬蜱属的某些种（如肩突硬蜱、篦子硬蜱等）。我国曾在黑龙江、内蒙古及新疆等地的全沟硬蜱中检测到嗜吞噬细胞无形体核酸。
我国的储存宿主、媒介种类及其分布尚需做进一步调查。
2. 传播途径
（1）主要通过蜱叮咬传播。蜱叮咬携带病原体的宿主动物后，再叮咬人时，病原体可随之进入人体引起发病。
（2）直接接触危重病人或带菌动物的血液等体液，有可能会导致传播，但具体传播机制尚需进一步研究证实。国外曾有屠宰场工人因接触鹿血经伤口感染该病的报道。
3. 人群易感性
人对嗜吞噬细胞无形体普遍易感，各年龄组均可感染发病。
高危人群主要为接触蜱等传播媒介的人群，如疫源地（主要为森林、丘陵地区）的居民、劳动者及旅游者等。与人粒细胞无形体病危重患者密切接触、直接接触病人血液等体液的医务人员或其陪护者，如不注意防护，也有感染的可能。
4. 地理分布和发病季节特点
目前，已报道有人粒细胞无形体病的国家有美国、斯洛文尼亚、法国、英国、德国、澳大利亚、意大利及韩国等，但仅美国和斯洛文尼亚分离到病原体。根据国外研究，该病与莱姆病的地区分布相似，我国莱姆病流行区亦应关注此病。
该病全年均有发病，发病高峰为5-10月。不同国家的报道略有差异，多集中在当地蜱活动较为活跃的月份。
（三）主要病理改变及临床表现。
病理改变包括多脏器周围血管淋巴组织炎症浸润、坏死性肝炎、脾及淋巴结单核吞噬系统增生等，主要与免疫损伤有关。嗜吞噬细胞无形体感染中性粒细胞后，可影响宿主细胞基因转录、细胞凋亡，细胞因子产生紊乱、吞噬功能缺陷，进而造成免疫病理损伤。
潜伏期一般为7-14天（平均9天）。急性起病，主要症状为发热、全身不适、乏力、头痛、肌肉酸痛，以及恶心、呕吐、厌食、腹泻等。实验室检查外周血象白细胞、血小板降低，肝酶升高。严重者可发展为多脏器功能衰竭、弥漫性血管内凝血，甚至死亡。老年患者及免疫缺陷患者感染本病后病情多较危重。
三、诊断、治疗和报告
医疗机构应按照《人粒细胞无形体病诊疗方案（试行）》（附件1）做好诊断和治疗。同时，应加强医务人员的个人防护和院内感染控制工作。
各级医疗机构发现符合病例定义的人粒细胞无形体病疑似、临床诊断或确诊病例时，应参照乙、丙类传染病的报告要求于24小时内通过国家疾病监测信息报告管理系统进行网络直报，报告疾病类别选择“其它传染病”。符合《国家突发公共卫生事件相关信息报告管理工作规范（试行）》要求的，按照相应的规定进行报告。
四、实验室检测
各级疾病预防控制机构专业人员和临床医务人员发现疑似病例时，应认真按照《人粒细胞无形体病实验室检测方案（试行）》（附件3）进行标本的采集、包装、运送和实验室检测。省级实验室无检测条件或无法鉴定时，应将原始标本及病原分离物送中国疾病预防控制中心进行检测。
五、流行病学调查
疾病预防控制机构接到疫情报告后，应按照《人粒细胞无形体病流行病学调查方案（试行）》（附件2），立即组织专业人员开展流行病学调查，追溯可能的感染来源，调查传播途径及相关影响因素，填写《人粒细胞无形体病个案调查表》（见附件2附表）。
出现聚集性病例时，应开展病例的主动搜索，并通过对传染源、传播途径、传播媒介及相关影响因素等的调查分析，及时提出有针对性的预防控制措施。
六、专题调查
有条件的地区，疾病预防控制机构可根据当地疫情的特点，参照《人粒细胞无形体病专题调查方案（试行）》（附件4），组织开展人群血清流行病学、宿主动物和传播媒介等方面的专题调查。
七、预防控制措施
（一）做好公众预防的指导和健康教育。
避免蜱叮咬是降低感染风险的主要措施。预防该病的主要策略是指导公众、特别是高危人群减少或避免蜱的暴露。有蜱叮咬史或野外活动史者，一旦出现疑似症状或体征，应及早就医，并告知医生相关暴露史。
蜱主要栖息在草地、树林等环境中，应尽量避免在此类环境中长时间坐卧。如需进入此类地区，尤其是已发现过病人的地区，应注意做好个人防护，穿着紧口、浅色、光滑的长袖衣服，可防止蜱的附着或叮咬，且容易发现附着的蜱。也可在暴露的皮肤和衣服上喷涂避蚊胺（DEET）等驱避剂进行防护。在蜱栖息地活动时或活动后，应仔细检查身体上有无蜱附着。蜱常附着在人体的头皮、腰部、腋窝、腹股沟及脚踝下方等部位。如发现蜱附着在身体上，应立即用镊子等工具将蜱除去。因蜱体上或皮肤破损处的液体可能含有传染性病原体，不要直接用手将蜱摘除或用手指将蜱捏碎。
蜱可寄生在家畜或宠物的体表。如发现动物体表有蜱寄生时，应减少与动物的接触，避免被蜱叮咬。
（二）开展医疗卫生专业人员培训。
各地应开展对医务人员和疾控人员的培训工作，提高医务人员发现、识别人粒细胞无形体病的能力，规范其治疗行为，以降低病死率；提高疾控人员的流行病学调查和疫情处置能力，控制疫情的蔓延和流行。
（三）提高实验室诊断能力。
发现疑似病例时，应及时采集标本开展实验室检测。各省级疾病预防控制中心应逐步提高对该病的实验室检测能力，建立实验室检测的相关技术和方法。已发生或可能发生疫情的地区及有条件的地市级疾病预防控制中心和医疗机构也应逐步建立该病的实验室诊断能力。
（四）媒介与宿主动物的控制。
出现暴发疫情时，应采取灭杀蜱、鼠和环境清理等措施，降低环境中蜱和鼠的密度。
（五）病人的管理。
对病人的血液、分泌物、排泄物及被其污染的环境和物品，应进行消毒处理。一般不需要对病人实施隔离。

附件：1. 人粒细胞无形体病诊疗方案（试行）
2. 人粒细胞无形体病流行病学调查方案（试行）
3. 人粒细胞无形体病实验室检测方案（试行）
4. 人粒细胞无形体病专题调查方案（试行）

附件1
人粒细胞无形体病诊疗方案
（试行）

为指导各地及时、有效地开展人粒细胞无形体病的诊断和救治工作，减少危重和死亡病例，防止院内感染的发生，特制定本方案。
一、临床表现
潜伏期一般为7-14天（平均9天）。急性起病，主要症状为发热（多为持续性高热，可高达40℃以上）、全身不适、乏力、头痛、肌肉酸痛，以及恶心、呕吐、厌食、腹泻等。部分患者伴有咳嗽、咽痛。体格检查可见表情淡漠，相对缓脉，少数病人可有浅表淋巴结肿大及皮疹。可伴有心、肝、肾等多脏器功能损害，并出现相应的临床表现。
重症患者可有间质性肺炎、肺水肿、急性呼吸窘迫综合症以及继发细菌、病毒及真菌等感染。少数病人可因严重的血小板减少及凝血功能异常，出现皮肤、肺、消化道等出血表现，如不及时救治，可因呼吸衰竭、急性肾衰等多脏器功能衰竭以及弥漫性血管内凝血死亡。
老年患者、免疫缺陷患者及进行激素治疗者感染本病后病情多较危重。
二、实验室检查
实验室检查外周血象白细胞、血小板降低，异型淋巴细胞增多。合并脏器损害的患者，心、肝、肾功能检测异常。病原学和血清学检查阳性。其中：
血常规：白细胞、血小板减少可作为早期诊断的重要线索。病人发病第一周即表现有白细胞减少，多为1.0-3.0×109/L; 血小板降低，多为30-50×109/L。可见异型淋巴细胞。
尿常规：蛋白尿、血尿、管形尿。
血生化检查: 肝、肾功能异常；心肌酶谱升高；少数患者出现血淀粉酶、尿淀粉酶和血糖升高。
部分患者凝血酶原时间延长，纤维蛋白原降解产物升高。可有血电解质紊乱，如低钠、低氯、低钙等。少数病人还有胆红素及血清蛋白降低。
三、并发症
如延误治疗，患者可出现机会性感染、败血症、中毒性休克、中毒性心肌炎、急性肾衰、呼吸窘迫综合症、弥漫性血管内凝血及多脏器功能衰竭等，直接影响病情和预后。
四、病例诊断
依据流行病学史、临床表现和实验室检测结果进行诊断。
（一）流行病学史。
1. 发病前2周内有被蜱叮咬史;
2. 在有蜱活动的丘陵、山区（林区）工作或生活史;
3. 直接接触过危重患者的血液等体液。
（二）临床表现。
急性起病，主要症状为发热（多为持续性高热，可高达40℃以上）、全身不适、乏力、头痛、肌肉酸痛，以及恶心、呕吐、厌食、腹泻等。个别重症病例可出现皮肤瘀斑、出血，伴多脏器损伤、弥漫性血管内凝血等。
（三）实验室检测。
1. 血常规及生化检查
（1）早期外周血象白细胞、血小板降低，严重者呈进行性减少，异型淋巴细胞增多。
（2）末梢血涂片镜检中性粒细胞内可见桑葚状包涵体。
（3）谷丙（丙氨酸氨基转移酶，ALT）和/或谷草（天冬氨酸氨基转移酶，AST）转氨酶升高。
2. 血清及病原学检测
（1）急性期血清间接免疫荧光抗体（IFA）检测嗜吞噬细胞无形体IgM抗体阳性。
（2）急性期血清IFA检测嗜吞噬细胞无形体IgG抗体阳性。
（3）恢复期血清IFA检测嗜吞噬细胞无形体IgG抗体滴度较急性期有4倍及以上升高。
（4）全血或血细胞标本PCR检测嗜吞噬细胞无形体特异性核酸阳性，且序列分析证实与嗜吞噬细胞无形体的同源性达99%以上。
（5）分离到病原体。
（四）诊断标准。
疑似病例：具有上述（一）、（二）项和（三）项1项中的（1）、（3）。部分病例可能无法获得明确的流行病学史。
临床诊断病例：疑似病例同时具备（三）项1项中的（2），或（三）项2项中的（1）或（2）。
确诊病例：疑似病例或临床诊断病例同时具备（三）项2项中（3）、（4）、（5）中的任一项。
五、鉴别诊断
（一）与其他蜱传疾病、立克次体病的鉴别：人单核细胞埃立克体病（HME）、斑疹伤寒、恙虫病、斑点热以及莱姆病等。
（二）与发热、出血及酶学指标升高的感染性疾病的鉴别：主要是病毒性出血性疾病，如流行性出血热、登革热等。
（三）与发热、血白细胞、血小板降低的胃肠道疾病的鉴别：伤寒、急性胃肠炎、病毒性肝炎。
（四）与发热及血白细胞、血小板降低或有出血倾向的内科疾病的鉴别：主要是血液系统疾病，如血小板减少性紫癜，粒细胞减少、骨髓异常增生综合征。可通过骨髓穿刺及相应病原体检测进行鉴别。
（五）与发热伴多项酶学指标升高的内科疾病鉴别：主要是免疫系统疾病，如皮肌炎、系统性红斑狼疮、风湿热。可通过自身抗体等免疫学指标进行鉴别。
（六）其他：如支原体感染、钩端螺旋体病、鼠咬热、药物反应等。
六、治疗
及早使用抗生素，避免出现并发症。对疑似病例可进行经验性治疗。一般慎用激素类药物，以免加重病情。
（一）病原治疗。
1. 四环素类抗生素
（1）强力霉素。为首选药物，应早期、足量使用。成人口服：0.1g/次, １日２次, 必要时首剂可加倍。８岁以上儿童常用量：首剂４mg/kg；之后，每次２mg/kg, １日２次。一般病例口服即可，重症患者可考虑静脉给药。
（2）四环素。口服：成人常用量为0.25-0.5g/次，每6小时1次；8岁以上儿童常用量为一日25-50 mg/kg，分4次服用。静脉滴注：成人一日1-1.5g，分2-3次给药；8岁以上儿童为一日10-20 mg/kg，分2次给药，每日剂量不超过1g。住院患者主张静脉给药。四环素毒副作用较多，孕妇和儿童慎用。
强力霉素或四环素治疗疗程不少于7天。一般用至退热后至少3天，或白细胞及血小板计数回升，各种酶学指标基本正常，症状完全改善。早期使用强力霉素或四环素等药物，一般可在24-48小时内退热。因人粒细胞无形体病临床表现无特异性，尚缺乏快速的实验室诊断方法，可对疑似病例进行经验性治疗，一般用药3-4天仍不见效者，可考虑排除人粒细胞无形体病的诊断。
2．利福平：儿童、对强力霉素过敏或不宜使用四环素类抗生素者，选用利福平。成人450-600mg，儿童10 mg/kg，每日一次口服。
3．喹诺酮类：如左氧氟沙星等。
磺胺类药有促进病原体繁殖作用，应禁用。
（二）一般治疗。
患者应卧床休息，高热量、适量维生素、流食或半流食，多饮水，注意口腔卫生，保持皮肤清洁。
对病情较重患者，应补充足够的液体和电解质，以保持水、电解质和酸碱平衡；体弱或营养不良、低蛋白血症者可给予胃肠营养、新鲜血浆、白蛋白、丙种球蛋白等治疗，以改善全身机能状态、提高机体抵抗力。
（三）对症支持治疗。
1. 对高热者可物理降温，必要时使用药物退热。
2. 对有明显出血者，可输血小板、血浆。
3. 对合并有弥漫性血管内凝血者，可早期使用肝素。
4. 对粒细胞严重低下患者，可用粒细胞集落刺激因子。
5. 对少尿患者，应碱化尿液，注意监测血压和血容量变化。对足量补液后仍少尿者，可用利尿剂。如出现急性肾衰时，可进行相应处理。
6. 心功能不全者，应绝对卧床休息，可用强心药、利尿剂控制心衰。
7. 应慎用激素。国外有文献报道，人粒细胞无形体病患者使用糖皮质激素后可能会加重病情并增强疾病的传染性，故应慎用。对中毒症状明显的重症患者，在使用有效抗生素进行治疗的情况下，可适当使用糖皮质激素。
（四）隔离及防护。
对于一般病例，按照虫媒传染病进行常规防护。在治疗或护理危重病人时，尤其病人有出血现象时，医务人员及陪护人员应加强个人防护。做好病人血液、分泌物、排泄物及其污染环境和物品的消毒处理。
（五）出院标准。
体温正常、症状消失、临床实验室检查指标基本正常或明显改善后，可出院。
（六）预后。
据国外报道，病死率低于1%。如能及时处理，绝大多数患者预后良好。如出现败血症、中毒性休克、中毒性心肌炎、急性肾衰、呼吸窘迫综合症、弥漫性血管内凝血及多脏器功能衰竭等严重并发症的患者，易导致死亡。

附件2
人粒细胞无形体病流行病学调查方案
（试行）
为做好人粒细胞无形体病疫情的流行病学调查，准确描述和分析疫情特征，科学制订防控策略和措施，特制定本方案。
一、调查目的
（一）为病例的核实诊断提供流行病学证据。
（二）为了解该病在我国的流行病学及临床特征积累数据。
二、调查对象
（一）散发病例：包括疑似病例、临床诊断病例、实验室确诊病例。
（二）聚集性病例：在同一村庄，或在同一山坡、树林、茶园、景区等地劳动或旅游的人员中，2周内出现2例及以上人粒细胞无形体病（疑似）病例，或在病例的密切接触者中出现类似病例。
三、调查内容和方法
（一）个案调查和标本采集。
发现人粒细胞无形体病病例后，应及时开展流行病学个案调查。调查内容包括病例的基本情况、家庭及居住环境、暴露史、发病经过、就诊情况、临床表现、实验室检查、诊断、转归、密切接触者情况等（见附表《人粒细胞无形体病个案调查表》），并采集相关标本（见附件3《人粒细胞无形体病实验室检测方案（试行）》）。
1. 基本情况
包括年龄、性别、住址、职业、文化程度、旅行史等。
2．临床资料
通过查阅病历及化验记录、询问经治医生及病例、病例家属等方法，详细了解病例的发病经过、就诊情况、临床表现、实验室检查结果、诊断、治疗、疾病进展、转归等情况。
3. 病例家庭及居住环境情况
通过询问及现场调查，了解病例及其家庭成员情况、家庭居住位置、环境、家禽及家畜饲养情况等。
4. 暴露史及病例发病前活动范围
（1） 询问病例发病前2周内劳动、旅行或可疑暴露史，了解其是否到过有蜱生长的场所，是否有蜱叮咬史。
（2） 询问病例发病前2周内与类似病例的接触情况，包括接触时间、方式、频率、地点、接触时采取的防护措施等。
5. 密切接触者
如病例出现出血并污染周围环境、物品时，应对医务人员、陪护人员或其他密切接触者开展追踪调查，必要时应采集相关标本进行检测。
（二）聚集性病例的调查。
在出现聚集性病例或暴发疫情时，应注意调查感染来源。如怀疑有人传人可能时，应评估人群感染及人传人的风险。应组织疾控人员或医务人员，采用查看当地医疗机构门诊日志、住院病历等临床资料、入户调查等方式，开展病例的主动搜索，并对搜索出的疑似病例进行筛查、随访。追踪疑似病例、临床诊断病例及实验室确诊病例的密切接触者，必要时采集相关样本进行检测。
通过查阅资料、咨询当地相关部门等方法，了解当地自然生态环境、媒介分布，以及相关的人口、气象、生产、生活资料等情况。
四、调查要求
（一）调查者及调查对象。
应由经过培训的县（区）级疾病预防控制机构专业人员担任调查员。现场调查时，应尽可能直接对病人进行访视、询问。如病人病情较重，或病人已死亡，或其他原因无法直接调查时，可通过其医生、亲友、同事或其他知情者进行调查、核实或补充。
（二）调查时间及调查内容。
应在接到疫情报告后迅速开展流行病学调查，调查内容见附表《人粒细胞无形体病个案调查表》。调查表应填写完整，实验室检测结果、病人转归等情况应及时填补到调查表中，以完善相关信息。
（三）调查者的个人防护。
在流行病学调查及标本采集过程中，调查者应采取相应的个人防护措施，尤其应注意避免被蜱叮咬或直接接触病人的血液、分泌物或排泄物等。
五、调查资料的分析、总结和利用
（一）在疫情调查处理进程中或结束后，应及时对流行病学资料进行整理、分析，撰写流行病学调查报告，并及时向上级疾病预防控制机构及同级卫生行政部门报告。
（二）疫情调查结束后，各省级疾病预防控制机构应及时将人粒细胞无形体病流行病学个案调查表及流行病学调查报告上报中国疾病预防控制中心。
（三）疫情调查结束后，各地疾病预防控制机构应将流行病学调查的原始资料、分析结果及调查报告及时整理归档。


附表
人粒细胞无形体病个案调查表
编码□□□□□□□□
1 一般情况
1.1姓名： (14岁以下同时填写家长姓名 )
1.2性别： ①男 ②女 □ 1.3出生日期： 年 月 日(若无详细日期,填写实足年龄 岁)
1.4职业：
(1)幼托儿童 (2)散居儿童 (3)学生 (4)教师 (5)保育员/保姆
(6)餐饮业 (7)公共场所服务业 (8)商业服务业(17)旅游服务业
(9)医务人员 (13)干部职员 (10)工人 (11)民工 (12)农民
(16)林业 (20)采茶 (21)牧民 (18)狩猎
(19)销售/加工野生动物 (14)离退人员 (15)家务待业
(22)不详 (23)其他 □
1.5工作单位：
1.6现住址： 　省　 　 市（地、州） 县（市、区）
乡（镇、街道） 村（居委会） 组（门牌）
1.7联系电话： 联系人： 与患者关系：
2 发病情况
2.1发病时间： 年 月 日
2.2就诊情况
就诊次数 就诊日期 就诊医疗机构 诊断 使用抗生素名称 使用激素名称
第1次
第2次
第3次
第4次
2.3 现住医院入院时间： 年 月 日
2.4住院号：
2.5入院诊断：
2.6是否出院：①是 ②否 □
如已出院：
2.6.1出院诊断：
2.6.2出院时间： 年 月 日
2.7 本次调查时病人情况： ①痊愈 ②好转 ③恶化 ④死亡 □
2.8 最后转归： ①痊愈 ②死亡 ③其它 □
3 临床表现
3.1首发症状、体征：
3.2主要症状、体征：
3.2.1发热 最高： ℃ 入院时： ℃ □
3.2.2畏寒 ①有 ②无 □
3.2.3头痛 ①有 ②无 □
3.2.4头晕 ①有 ②无 □
3.2.5乏力 ①有 ②无 □
3.2.6全身酸痛 ①有 ②无 □
3.2.7淋巴结肿大①有 ②无 □
3.2.7.1若有，肿大部位及大小：
3.2.8巩膜黄染 ①有 ②无 □
3.2.8.1若有，出现时间： 年 月 日
3.2.9眼结膜充 ①有 ②无 □
3.2.10皮肤淤点 ①有 ②无 □
3.2.10.1若有, 出现部位：
3.2.10.2出现时间： 年 月 日
3.2.11皮肤淤斑 ①有 ②无 □
3.2.11.1若有, 出现部位：
3.2.11.2出现时间： 年 月 日
3.2.12牙龈出血①有 ②无 □
3.2.13有无皮疹①有 ②无 □
3.2.13.1若有, 出现部位：
3.2.13.2 皮疹性质：
3.2.13.3出现时间： 年 月 日
3.3 呼吸系统症状
3.3.1咳嗽 ①有 ②无 □
3.3.2咳痰 ①有 ②无 □
3.3.3咯血 ①有 ②无 □
3.3.4呼吸困难 ①有 ②无 □
3.4 消化系统症状
3.4.1食欲减退 ①轻度 ②厌食 ③无 □
3.4.2恶心 ①有 ②无 □
3.4.3呕吐 ①有 ②无 □
3.4.4呕血 ①有 ②无 □
3.4.5腹痛 ①有 ②无 □
3.4.5.1腹痛部位 ①上腹部 ②下腹部 ③其它 □
3.4.5.2腹痛性质 ①绞痛 ②灼烧样痛 ③钝痛 ④压痛 ⑤其它 □
3.4.6腹胀 ①有 ②无 □
3.4.7腹泻 ①有， 次/天 ②无 □
3.4.8大便性状 ①血便　②黑便　③水样便 ④其它 □
3.4.9口腔溃疡 ①有 ②无 □
3.5 运动系统症状
3.5.1关节疼痛 ①有 ②无 □
3.5.1.1 部位：
3.5.2肌肉疼痛 ①有 ②无 □
3.5.2.1部位：
3.6 循环系统症状
3.6.1心慌 ①有 ②无 □
3.6.2相对缓脉 ①有 ②无 □
3.6.3胸闷 ①有 ②无 □
3.6.4胸痛 ①有 ②无 □
3.7 泌尿系统症状
3.7.1尿急、尿频①有 ②无 □
3.7.2肾区疼痛 ①有 ②无 □
3.8 精神神经症状
3.8.1表情淡漠 ①有 ②无 □
3.8.2烦躁 ①有 ②无 □
3.8.3抽搐 ①有 ②无 □
3.8.4昏迷 ①有 ②无 □
3.9 其它：
4 实验室检查
4.1 血常规
序次 检查日期 WBC(109/L) N(%) L(%) 异型淋巴细胞 PLT(109/L) 检测单位



4.2 尿常规
序次 检查日期 尿蛋白 血尿 管型尿 检测单位



4.3 肝功能
序次 检查日期 谷丙转氨酶 谷草转氨酶 检测单位



4.4 其它检测
序次 检查日期 X－线 肾功能 血糖 出凝血 时间 其他 检测单位




4.5 血清学和病原学检查
标本类型 采集时间 检测时间 检测方法 检测结果 检测单位




5 住院用药情况（抗生素、激素、生白药）
用药名称 剂量 起始日期 终止日期




6 流行病学调查
6.1 发病前两周活动史
日期 所到地点 从事活动种类1 频次 累计停留时间（小时） 暴露方式2



注：1.活动种类（可重复、多选）： ①采茶 ②割草 ③打猎 ④放牧　
⑤采伐 ⑥旅游 ⑦其它： □
2.暴露方式：①草地休息 ②草丛、灌木丛行走 ③与动物接触 ④其它 □
6.2当地是否有蜱（蜱的当地俗名： ）： ①有 ②无 ③不知道 □
6.3是否见过蜱（蜱的当地俗名： ）： ①是 ②否 ③不认识 □
6.3.1若见过，地点：
6.4是否被蜱叮咬过①是 ②否 ③不知道 □
6.4.1若被叮咬过，时间及次数： ①1个月前，次数
②1个月内，次数
第一次叮咬时间： 年 月 日
第二次叮咬时间： 年 月 日
6.4.2叮咬部位(可多选)： ①脚 ②腿 ③腹部 ④背部 ⑤颈部 ⑥其他 □
6.4.3叮咬时有无疼痛感？①有 ②无 □
6.5发病前两周有无皮肤破损： ①有 ②无 □
6.6是否听说过类似病例： ①是 ②否 □
6.6.1 若听说过，病例姓名：
病例具体住址：
6.7发病前是否接触过类似病人： ①是 ②否 □
6.7.1 所接触病人情况
姓名 性别 年龄 现住址 关系 诊断 接触时间(最早~最晚) 接触频次 接触方式 联系方式



注：接触方式(可多选)： ①直接接触病人血液 ②直接接触病人分泌物、排泄物
③救治/护理 ④同处一室 ⑤其它（在表中注明） □

6.8 饲养与接触动物情况
动物种类 数量 动物身上是否有蜱附着 发病前2周是否与动物接触



6.9 患者家庭居住地地理环境描述(地形地貌及附近有无蜱类生长)
6.9.1住宅周围环境有无杂草灌木生长： ①有 ②无 □
6.9.2住室内卫生状况： ①好 ②一般 ③差 □
6.10病前一个月家中是否发现过老鼠？ ①有 ②无 ③不知道 □
6.11病前一个月内是否接触其它野生动物？①是 ②否 ③不知道 □
如是，接触时间： 年 月 日
接触方式：
7. 调查小结：

调查单位：
调查人员签名：
调查时间： 年 月 日

附件3
人粒细胞无形体病实验室检测方案
（试行）
为保证及时、科学地采集、运送人粒细胞无形体病病例（包括疑似病例）及疫源地调查的各种类型标本，规范人粒细胞无形体病的实验室检测程序，提高检测质量，为明确诊断或开展相关的科学研究提供实验室依据，特制定本方案。
一、样本采集对象
（一） 人粒细胞无形体病病例（包括疑似病例，以下同）。
（二） 病例密切接触者或其他健康人群。
（三） 疫源地可疑宿主动物（野生动物及狗、羊、牛等家畜）、媒介蜱。
二、标本种类及采集方法
（一） 抗凝血。
常用EDTA抗凝管或枸橼酸盐抗凝管采集血液5ml，用于病原分离。应尽可能在病人使用抗生素前进行血液的采集。
（二）非抗凝血。
用无菌真空管，采集病例、健康人群及宿主动物非抗凝血5ml，用于血清抗体及PCR检测。采集后，应及时分离血清，将血清、血球分别保存。急性期抗体及PCR检测用血液采集尽可能在发病后1周内，恢复期抗体检测标本采集至少间隔2-3周。如第2份血清在1个月之内抗体升高不明显的，应建议间隔2-4周后采集第3份血液标本。
（三）包涵体检测血涂片的制备。
采集血液标本后，制作厚血片，进行红细胞裂解处理等。
（四）媒介蜱标本的采集。
采集动物体表媒介蜱，用镊子夹取，放入铺垫有潮湿滤纸或纱布的青霉素小瓶或试管中，用纱布包紧瓶口以防止蜱爬出。实验室接到蜱标本后，首先应进行种属鉴定，然后按类别分组（1-5只蜱/组），采用75%酒精浸泡30min后，用无菌蒸馏水反复冲洗3次。最后进行分组研磨，研磨液用于提取DNA，进行PCR扩增。
（五）有条件时，可采集活检或尸检标本，冰冻、福尔马林固定或石蜡包埋后进行实验室检测。具体方法参照病理实验室相关要求和卫生部《传染病人或疑似传染病人尸体解剖查验规定》的相关要求。
三、标本采集和保存注意事项
标本采集应符合无菌操作要求。抗凝血如不能立即床边接种，应置于4℃环境保存，避免冰冻（不超过2周）。非抗凝血应及时进行无菌分离血清，血清用于抗体检测，血球部分研磨后提取DNA用于PCR检测。如不能及时检测，可暂置于－20℃环境保存。所有标本应置入大小适合、带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内，拧紧管口。
标本采集后，应认真填写采样登记表。
四、实验室检测
（一）包涵体的检测。
1. 血片及白细胞涂片制备
采集的抗凝血标本尽快用血球层推血片，待干燥后冷丙酮固定10min；或提取抗凝血中的白细胞并进行涂片，待干燥后冷丙酮固定10min。
2. 染色
通常采用瑞氏（Wright）染色法、姬氏(Giemsa)染色法及瑞－姬混合染色法。有条件的实验室，可使用美国CDC推荐的染色方法。
3. 染液配置方法
（1）瑞－姬染液：取瑞氏染料和姬氏染料各0.5 g，以甲醇研溶，加甲醇500ml保存，每天摇匀１次，１周后可使用。
（2）改良Mc Donald法瑞－姬染色剂：75 ml甘油（分析纯）中加入磷酸盐缓冲液（Na2HPO4 1g和KH2PO4 2g），以4 ml蒸馏水溶解，37 ℃水浴24 h溶解混匀，用滤纸过滤，保存于密封的棕色瓶中备用。上述甘油缓冲液1.5 ml加瑞－姬染色剂50 ml，混匀后备用。
4. 染色步骤
血推片或白细胞涂片分别以两种染色剂染色2 min，再加蒸馏水作用5 min，用自来水冲洗。
5. 结果观察
中性粒细胞中可见桑葚状包涵体（见图1），并注意保存相关标本，以便进行复核。
（二）血清学检测。
常用血清学方法为间接免疫荧光（IFA）法。采集急性期（发热初期，一般发病1周内）与恢复期（至少间隔2-3周）双份血清。如恢复期血清抗体检测阴性，应建议医生采集第3份血液样本（间隔2-4周）。
1. 试剂
使用国际推荐的、经过ISO质量认证的产品。
2. 方法及操作按说明书进行。
3. 结果解释
IFA检测结果解释按说明书进行。
如果同时检测双份血清，IgG抗体4倍升高，则结果强烈支持嗜吞噬细胞无形体感染。如果急性期抗体升高，而恢复期没有升高或轻微升高，则应采集第3份血液样本（间隔2-4周）进行进一步检测。
（三）嗜粒细胞无形体核酸PCR检测。
目前，国际推荐使用16S rRNA基因检测方法，有条件的实验室，可进一步选用热休克蛋白基因groEL扩增方法。
1. DNA提取
用急性期、未使用抗生素的EDTA抗凝血或非抗凝血血球部分、白细胞及蜱研磨液提取DNA。最后，以AE缓冲液50µl抽滤以提高回收的DNA浓度。如采用血液白细胞层提取DNA，可明显提高阳性检出率。实验时，应采集当地正常人血液同时提取DNA，作为PCR的阴性对照。
2. PCR扩增
（1）16S rRNA基因检测：16S rRNA 高度保守，是PCR检测最常用的扩增靶基因，巢式PCR检测可提高检测灵敏度和特异度，采用属特异及种特异引物同时进行检测。PCR检测应分区进行，避免污染。使用引物序列见表1。
表1 巢式PCR检测无形体及埃立克体16S rRNA基因常用引物
引物名称 序 列 片段长度(bp)
Eh-out1(AF414399) 5’-TTG AGA GTT TGA TCC TGG CTC AGA ACG-3’ 653
Eh-out2(AF414399) 5’-CAC CTC TAC ACT AGG AAT TCC GCT ATC-3’
Eh-gs1(AF414399) 5’-GTA ATA CT GTA TAA TCC CTG-3’ 282
Eh-gs2(AF414399) 5’-GTA CCG TCA TTA TCT TCC CTA-3’
HGA1 5’-GTC GAA CGG ATT ATT CTT TAT AGC TTG -3’ 389
HGA2 5’-TAT AGG TAC CGT CAT TAT CTT CCC TAC-3’

PCR反应混合物的准备按常规进行。第一轮反应采用外引物对Eh-out1和Eh-out2，DNA模板10µl（白细胞提取的DNA可适当减少）。PCR反应体系总体积为25µl或50µl（需要进行PCR测序或克隆时，应适当扩大反应体系），其它成分的浓度按常规进行。反应程序如下：
94℃ 5min
40循环：94℃ 45sec
55℃ 50sec
72℃ 1min
72℃ 总延伸 5min
第二轮反应使用2对引物分别进行巢式PCR。2对引物分别是无形体属及埃立克体属通用内引物（Eh-gs1、Eh-gs2）；以及HGA种特异性引物（HGA1及HGA2）。检测样本取第一轮产物1-2µl为模板，阳性对照取0.5µl为模板。反应程序同第一轮反应。
（2）热休克蛋白基因groEL扩增
与groEL基因的应用相比，16S rRNA基因的应用更为广泛，但groEL基因在不同种属间具有较大的变异性。因此，对于诊断及菌株的鉴定，groEL基因均具有重要意义。该基因扩增使用巢式PCR，引物序列见表2。
表2 groEL基因扩增常用引物
引物名称 序 列 退火温度 片段长度bp)
HS1 5’-TGG GCT GGT A（A/C）TGA AAT 52℃ 1431
HS6 5’-CCI CCI GGI ACI A（C/T）ACC TTC
HS43 5’-AT（A/T）GC（A/T） AA（G/A）GAA GCA TAG TC 55℃ HGA480
HS45 5’-ACT TCA CG（C/T）（C/T）TCA TAG AC HME528
DNA提取同上。PCR检测时，反应混合物的准备按常规进行。DNA模板量同16S rRNA基因检测。巢式PCR第一轮反应采用外引物对HS1及HS6。
反应程序如下：
3循环：94℃ 1min
48℃ 2min
70℃ 90sec
37循环：88℃ 1min
52℃ 2min
70℃ 90sec
68℃ 总延伸 5min
第二轮PCR引物采用HS43及HS45。检测样本取第一轮产物1-2µl为模板，阳性对照取0.5µl为模板。反应程序同第一轮反应。反应程序同第一轮反应，但退火温度由52℃改为55℃。
3．测序及分析
对扩增产物进行测序并进行同源比较，分析当地流行株与其它地区的变异性。
（四）病原体分离培养。
多用HL-60进行嗜吞噬细胞无形体的分离培养。最常用的分离方法是将白细胞部分接种培养基，然后将100-500µl抗凝血接种到悬浮有2×105或1×106细胞内, 每2-3天染色检查包涵体，一般5-10天可查见包涵体。由于分离可能受到红细胞的影响，因此，建议使用以下方法：
1.白细胞分离：采用密度梯度离心方法（Ficoll-Paque）。一般采用2-3 ml EDTA抗凝血，用2倍体积的无菌Hanks 平衡盐溶液稀释，最后采用Histopaque（Sigma，St . louis, Mo）密度梯度离心分离白细胞，可以获得较高的白细胞，用以分离HGA。采用白细胞分离方法进行接种时，应注意防止操作过程中的污染。
2. 红细胞裂解后收集白细胞（NHCl4裂解法）。
3. 在使用含有红细胞的标本培养后，另加入宿主未感染的细胞，建立混合培养。
血液白细胞悬浮于2ml体积、含有5-10%胎牛血清的培养基中，且在25 cm2培养瓶内与培养细胞作用3小时。37℃、5% CO2 条件下振摇孵育，可增加病原体与细胞的作用。
病原体的鉴定：可通过种特异引物进行PCR鉴定。
五、生物安全
在标本采集、运输及实验室工作过程中，生物安全应参照《病原微生物实验室生物安全管理条例》中的有关要求进行。
（一）实验室生物安全。
标本灭活、病原DNA标本提取及病原体分离操作应在生物安全Ⅱ级实验室进行。非感染性材料的检测可在生物安全I级实验室进行。
（二）血液标本采集安全注意事项。
采集病例的标本时，应做好个人防护。采集者应戴乳胶手套，尽量避免病例的血液外溢或直接接触。如发生血液外溢污染环境时，应及时采用75%酒精或常用消毒剂进行消毒处理。应按照对传染性样本的要求，对采集标本的器具及病人止血棉球及时进行消毒处理。防止锐器扎伤皮肤，一旦发生，应按临床外科要求，及时进行伤口清创。如直接沾染了临床诊断病例或确诊病例的血液，除及时消毒皮肤外，应口服强力霉素预防感染，服用剂量参照《人粒细胞无形体病诊疗方案（试行）》（附件1）。
（三）采集动物宿主与媒介蜱标本个人防护。
野外采集标本时，应穿着颜色明亮的防护服，并将衣袖或裤管口扎紧以防蜱叮咬人体，且容易发现蜱的附着。一旦发现有蜱附着体表，应用镊子夹取，不要用手直接摘除。野外作业或活动的人员可使用驱避剂或防蚊油喷涂皮肤，也可用硫化钾代替防蚊油。
（四）标本运输安全注意事项。
应参照《病原微生物实验室生物安全管理条例》中的有关要求（B类）进行。
（五）在诊疗及标本的采集、包装和实验室检测等过程中所产生的医疗废物，应按照《医疗废物管理条例》和《医疗卫生机构医疗废物管理办法》等相关规定处理。

附件4
人粒细胞无形体病专题调查方案
（试行）
为指导发生疫情的地区开展人粒细胞无形体病的调查，增进对该病病原学、传播机制、危险因素及临床诊断等的认识，为制订相应的防控策略和措施提供科学依据，特制订本方案。
一、调查目的
（一）了解人粒细胞无形体病疫区人群感染状况及抗体水平。
（二）了解人粒细胞无形体病主要的潜在传播媒介的种类、分布及带菌状况。
（三）了解人粒细胞无形体病常见的动物宿主种类、分布及带菌状况。
二、调查内容与方法
（一）血清流行病学调查。
1. 调查对象
（1）可能暴露者：与患者有类似暴露史的人员（暴露于有可疑野生动物或蜱的生境）。
（2）密切接触者：与患者密切接触者（参与救治的医护人员、护理患者的家属等）。
（3）一般人群：与患者无密切接触，也无可疑生境暴露者。
2. 标本采集
对所有密切接触者应采集双份血清，间隔3-4周，另应采集可能暴露者及一般人群血清各30-50份。每次采集静脉血5ml，分离血清送检。血清标本的包装、贮存及运送见《人粒细胞无形体病实验室检测方案（试行）》（附件3）。
3. 标本检测
采集的标本应及时送有条件的省级疾病预防控制中心进行抗体检测。如当地无检测条件，应送中国疾病预防控制中心进行检测。检测方法及注意事项见《人粒细胞无形体病实验室检测方案（试行）》（附件3）。
（二）宿主动物调查。
根据流行病学调查的线索，确定是否进行宿主动物的调查。
1. 调查地点和时间
在病例可能感染的地点，或根据当地的地理景观，选择宿主动物调查的地点。调查时间可选择在疫情发生后或宿主动物活动高峰季节。
2. 捕获方法
（1）居民区采用笼夜法。在鼠类经常出没的场所，于傍晚时在每15m2的房间放置鼠笼一个，并做好标记。诱饵用花生米或油条、油饼等（同一地区应选用同一种诱饵）。次日清晨取回鼠笼，将捕获鼠的鼠笼放入布鼠袋内，系紧袋口，做好记录，并编号。
（2）野外采用夹（笼）夜法。在有鼠活动的场所，于傍晚时布放鼠夹（笼），夹（笼）的行距应在30m以上，夹（笼）间距为5m，并做好标记。诱饵应统一。次日清晨取回夹（笼），将捕获鼠放入布鼠袋内，系紧袋口，做好标记，并编号。如捕白天活动的鼠，采用夹（笼）日法。
（3）鼠类以外的其它野生宿主动物（如野兔等）可通过有关渠道获取。
3. 标本处理

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